hvordan du foretager fejlfinding agarosegel elektroforese

DNA- fragmenter er ofte adskilt baseret på størrelse med en proces, der kaldes agarose gelelektroforese . Fordi DNA er negativt opladet , vil DNA-fragmenter bevæger sig i et elektrisk felt . Ved at indlæse en prøve , der indeholder DNA-fragmenter i boringer i en slab af agarose gel og anvende et elektrisk felt , kan en videnskabsmand eller tekniker adskille DNA-fragmenter , som mindre fragmenter vil bevæge sig gennem gelen hurtigere end store. Agarose gelelektroforese er meget udbredt i DNA fingeraftryk og DNA- sekventering , men nogle gange er utilfredsstillende , og proceduren kræver fejlfinding .
1 .
Prøv at øge mængden af DNA du føjer til brøndene , hvis DNA bånd er svage eller mangler . Koncentrationen kan være utilstrækkelig , eller mængden kan være for lidt . Sørg dog, at mængden af DNA tilsat pr godt ikke overstiger 50 nanogram . Det er også muligt DNA blev nedbrudt , tjekke den procedure , du bruger til at rense eller forstærke den DNA for at sikre, at du ikke forurener løsning med nucleaser ( enzymer , der nedbryder DNA) . Hvis du er farvning med ethidiumbromid at visualisere DNA , bruger den forkerte lyskilden kan også forårsage dette problem . Prøv at bruge en kort bølgelængde som 254 nanometer for en bedre behandling.
2 .
Prøv den spænding , du bruger , hvis du bemærker , at DNA bands mangler . Hvis du bruger for meget spænding eller elektroforese prøven for længe , lille DNA- fragmenter kan migrere hele vejen på tværs af pladen og ret off gelen . Prøv at gentage proceduren , men med en lavere spænding eller for en kortere tid . Spændingen skal aldrig overstige 20 volt pr centimeter . Det er også muligt , at du ikke tid nok til den procedure , i hvilket tilfælde DNA molekyler af samme størrelse kan ikke adskilles ved tilstrækkelig afstand , at du kan løse dem klart . Prøv at gentage proceduren for en længere periode. Det er også muligt , du har brug for en højere procentdel gel , hvilket betyder en gel , der har mere agarose og er dermed tykkere og mindre gennemtrængelig. Sørg for buffer du bruger , når du blander gel er det samme som elektroforese buffer .
3 .
Prøv at reducere mængden af DNA du tilføje , hvis du bemærker bands er udtværede. Det er også muligt, at der er for meget salt i DNA , eller at prøven er forurenet med proteiner , tjekke den procedure , du bruger til at udtrække og rense DNA til elektroforese at sikre, at du efter din lab 's protokol . Se også bufferkapacitet , hvis DNA i anoden og katoden kamre har ændret sig i løbet af proceduren , har du måske utilstrækkelig bufferkapacitet i elektroforese buffer . Høj temperatur eller for meget spænding kan også forårsage dette problem ; temperaturen bør ikke overstige 30 grader Celsius i løbet af denne procedure . Endelig kan små grupper af DNA har spredte til en vis grad , mens du var farvning at visualisere bands . Hvis dette sidste er problemet , kan du prøve at tilføje ethidiumbromid under elektroforese
4
agarosegel elektroforese har begrænsede beføjelser til at løse meget små fragmenter-. de under 200 basepar . Hvis du har brug for at adskille meget små DNA-fragmenter , kan du ønsker at bruge polyacrylamid gel elektroforese i stedet .


Kommentarer

Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

link:

  • Om os
  • Advertising
  • Fortæl redaktionen
  • Få nyhedsbreve
  • RSS-feed

Redaktør: Karin Christofferse
Nyheder redactor: Morten Nyberg

Kundeservice: Stig Ole Salomon,
Flemming Sørensen

Tel: +45 00 99 99 00
Fax: +45 00 99 99 01

© Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.