hvordan man bruger genskabe vestlige skamplet stripping buffer 21059

Western blotting er en bioteknologisk teknik til påvisning af et specifikt protein i en prøve . Det indebærer adskillelse proteiner efter størrelse og beregning , ved hjælp af en procedure kaldet gelelektroforese , overføre dem til en PVDF eller nitrocellulose membran , og tilføje den primære antistoffer. Hvis det protein af interesse er til stede , antistofferne binder sig til det .

Endelig forskeren tilføjer sekundære antistoffer , der binder til det primære antistoffer . Den secondarty antistoffer bære et enzym , der udsender lys i tilstedeværelse af protein; den mængde lys , de udsender afspejler mængden af protein i prøven .

Restore er et mærke af skamplet selskabstømning buffer , som du kan bruge til at fjerne de primære og sekundære antistoffer , hvis du har brug for at re-sonde prøven .
1 .
Varm op flaske Restore Western Blot Afisolering Buffer 21059 , indtil det er ved stuetemperatur . Forlader flasken ud i flere timer , eller natten over , vil bringe det til stuetemperatur . Hvis det er nødvendigt , kan du tjekke det med et termometer .
2 .
Vask skamplet med vaskebuffer for at fjerne eventuelle kemiluminescerende substrat , der forbliver fra den første sondering . Tilføj nok Gendan Western Blot Afisolering Buffer til helt våd plet . Producenten anbefaler 20 ml som en passende mængde til en 8- af -10-centimeter skamplet .
3 .
Inkub¨¦r skamplet med buffer ved stuetemperatur . Hvis antistofferne du brugte til at undersøge den skamplet var høje affinitet , kan det være nødvendigt at udruge den skamplet på lidt højere temperatur på 37 grader Celsius ( 98 . 6 grader Fahrenheit ) og tillade mere tid . Generelt dog bør 5 til 15 minutter være tilstrækkelig til at fjerne både den primære og sekundære antistoffer .
4 .
Tilsæt kemiluminescens peberrodsperoxidase substrat til skamplet , og læg et ark fotografiske film på membranen . Filmen vil skifte farve , når lyset rammer den . Hvis den fotografiske film ikke har påvist nogen lys udsendt fra prøven efter 5 minutter, har du fjernet det sekundære antistof og dets konjugat enzym .
5 .
Tilsæt det sekundære antistof til skamplet . Vask skamplet i vaskebuffer og udsætte det igen til fotografiske film , lige som i trin 4 .

Hvis du ikke kan se en ændring efter 5 minutter, har du fjernet det primære antistof, der kan re-sonde blottet for at validere dine tidligere resultater .

Hvis du ikke har kunne fjerne enten primær eller sekundær antistof , re-Inkubér skamplet i Fjern Western Blot Afisolering buffer , som beskrevet i trin 2 og 3 . Tillad en yderligere 5 til 15 minutter for at sikre fjernelse af både den primære og sekundære antistoffer , og derefter gentage trin 4 og 5 .

6170254241.pdf 6170255044.pdf


Kommentarer

Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

link:

  • Om os
  • Advertising
  • Fortæl redaktionen
  • Få nyhedsbreve
  • RSS-feed

Redaktør: Karin Christofferse
Nyheder redactor: Morten Nyberg

Kundeservice: Stig Ole Salomon,
Flemming Sørensen

Tel: +45 00 99 99 00
Fax: +45 00 99 99 01

© Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.