hvordan du foretager fejlfinding HPLC kolonner

Kolonnen af en high performance væskekromatografi ( HPLC ) maskine er den stationære fase af udpakningen . Væsken-typisk en bufferopløsning-løbende flyder over kolonnen den mobile fase . Da kemikalier injiceres i HPLC de flyder med den mobile fase over kolonnen og elueres på forskellige og bestemte tidspunkter for at producere et kromatogram . Højden af toppene på kromatogrammet fortæller dig mængden af det kemiske stof i din analyserede prøve . Kolonne forårsager dårlige resultater , så fejlfinding er vigtig .

Du skal bruge:
HPLC maskine
. Analytisk standard i den ønskede koncentration .
Injektionssprøjte (hvis nødvendigt ) .
Ny kolonne ( hvis nødvendigt) .


1 .
Start op HPLC og lad den stabilisere sig den tid , der er standard i din lab -protokol . I mellemtiden udgør den analytiske standard (er ), der benyttes på din HPLC ( dette vil variere afhængigt af , hvad dit laboratorium og HPLC analyser ) . Når maskinen er i ligevægt , injiceres en standard på maskinen-dette vil enten ske ved hånden ved hjælp af en sprøjte eller ved at indlæse din maskines autosampler .
2 .
Kig på kromatogrammet produceret af standarden . Dette er din bedste indikation for kolonne problemer . De følgende trin vil udpege fælles kolonne emner fundet fra denne chromatogrammet
3
Kontroller elueringstiden-. den tid, det tager for den standard peak skal vises . Resultaterne vil variere for forskellige kemikalier , men din lab skal have et " best case scenario " tid til et højdepunkt skal vises . Hvis de høje dukker op meget tidligt , betyder det materiale inde i din kolonne nedbryde og spalte skal udskiftes . Hvis toppen er meget langt ude dette kan indikere kolonnen var ikke forberedt godt . I dette tilfælde kan kolonnen stadig bruges hvis toppen er stadig god nok til dit laboratorium behov ( jo længere elueringstiden , jo mindre peak vil være) .
4 .
Undersøg formen på top . Ideelt set bør du ønsker en top , der stiger kraftigt og har en symmetrisk form . Et bredt " hill -lignende " peak angiver materiale i kolonnen nedbryder ligesom et højdepunkt , at " halen "-har en længere skråning i den ene ende end den anden . I begge disse tilfælde kan kolonnen stadig bruges, hvis resultaterne er gode nok til dine behov . Du kan forlænge livet for den kolonne, du kan være i stand til at " flip " den ( fjerne kolonne og dreje den til at flyde den modsatte vej ) . Dette kan igen pakke materialet indeni, men virker ikke altid .
5 .
Undersøg baseline ( linjerne op til din peak ) . Hvis linjen ikke er glat , er dette kaldes " støj " i udgangssituationen . Sharp , takkede støj sandsynligvis elektrisk , men tilfældige " ujævn " støj kan vise kolonne har forurenende stoffer. Prøv at køre friske mobile fase over den kolonne for at rense det . Hvis det stadig er støjende , følg din lab protokol til istandsættelse kolonnen . Hvis det er stadig støjende du bliver nødt til at erstatte kolonnen . Nogle støj kan tolereres , så længe det ikke forstyrrer dine aflæsninger .

gode råd og advarsler


  • HPLC fejlfinding kræver tålmodighed . Prøv en ting ad gangen for at løse problemer og får mulighed for rigelig tid til at ligevægt mellem dine forsøg .
  • Hold altid din mobil fase og injektionssprøjte rene . Rør ikke ved kanylen af sprøjten med dine hænder , eller du kan introducere hudfedt i kolonnen .
  • Brug standard lab sikkerhed protokoller når du arbejder på HPLCs .

  • Kommentarer

    Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

    link:

    • Om os
    • Advertising
    • Fortæl redaktionen
    • Få nyhedsbreve
    • RSS-feed

    Redaktør: Karin Christofferse
    Nyheder redactor: Morten Nyberg

    Kundeservice: Stig Ole Salomon,
    Flemming Sørensen

    Tel: +45 00 99 99 00
    Fax: +45 00 99 99 01

    © Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.