hvordan man kan berøve et Western blot

Western blot , eller protein immunblotting , er en procedure, der detekterer tilstedeværelsen af specifikke proteiner i en prøve . Overførsel af proteiner til en membran efter elektroforese giver mulighed for påvisning af target-proteiner , antistof -linked enzymer tillægger det enkelte protein , og producere en farve når de udsættes for en bestemt substrat . Stripping en Western blotting membran fysisk fjerner resterende proteiner og antistoffer

Du skal bruge: .
Glycine
Natriumdodecylsulfat nedbør reagens , 2 % .
Tween 20 .
pH- meter .
TBST buffer opløsning ( 1x ) .
PBS buffer opløsning ( 1x ) .
Lille glas fad .
1- liters glasflaske .
Saltsyre ( HCI ) .
Ultrarent vand .
Pincet .
Antistof film og reagens .
Antistof indikator løsning .


1 .
Sted 10 ml af Tween 20 , 15 gram glycin , og 1 gram natrium dodecyl sulfat ( SDS ) i en 1- liters glas kolbe . PH indstilles til 2,2 med saltsyre , måling ved hjælp af et pH-meter . Tilsæt så meget ultrarent vand, at det samlede volumen til 1 liter . Brug denne buffer første .
2 .
Anbring den brugte membran i glasfad . Tilføj nok af buffer , der produceres i forrige trin for at dække membranen . Efter 10 minutter , kasseres de anvendte buffer , og der tilsættes frisk buffer . Igen , vent 10 minutter og kassér den brugte buffer .
3 .
Hæld nok PBS buffer i glasfad til at dække membranen . Vent i 10 minutter og kassér buffer . Hæld frisk PBS buffer i glasset parabol og vente yderligere 10 minutter. Kassér den brugte buffer .
4 .
Hæld nok TBST buffer i glasfad til at dække membranen . Vent i fem minutter og kassér den brugte buffer . Hæld frisk TBST buffer i glasset fad. Igen , vente fem minutter, og kassér den brugte buffer .
5 .
Test effektiviteten af stripning procedure ved at udsætte membran til antistoffer , som vil lægge til enhver resterende proteiner , som det kræves af den særlige vestlige skamplet procedure du følger . Udsæt antistoffer mod en indikator løsning . Hvis der ikke er nogen reaktion ( angivet af mangel på farveændring ) , membranen er klar til genbrug .

gode råd og advarsler


  • inkuberes membranen ved stue temperatur under hele proceduren .
  • Håndter membranen med steril pincet for at undgå forurening .
  • kemikalier , der anvendes i denne procedure kan medføre personskade. Bære en lab coat , beskyttelsesbriller og handsker under hele proceduren.
  • Udfør denne procedure i et sterilt miljø , såsom en laminar flow hætte , for at undgå forurening af membranen .

  • Kommentarer

    Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

    link:

    • Om os
    • Advertising
    • Fortæl redaktionen
    • Få nyhedsbreve
    • RSS-feed

    Redaktør: Karin Christofferse
    Nyheder redactor: Morten Nyberg

    Kundeservice: Stig Ole Salomon,
    Flemming Sørensen

    Tel: +45 00 99 99 00
    Fax: +45 00 99 99 01

    © Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.