hvordan man kan pletten en gel med Coomassie blå

Denne Sådan artikel giver en detaljeret protokol til farvning en SDS polyacrylamid gel med Coomassie blå . Dette vil gøre det muligt for teknikeren at visualisere alle de proteiner på gelen

Du skal bruge: .
Standard biologi lab materialer vil blive krævet
  Alle reagenser vil ske i henhold til denne artikel .
.


1 .
First things first . . . du skal komme med et par løsninger på forhånd . Disse omfatter en fastsættelse løsning , vaskeopløsning , Coomassie pletten løsning , affarves løsning, og storage-løsning .
2 .
Fastsættelse løsning (50 % ethanol i vand w /10 % eddikesyre ) bør forberedes ved at tilsætte 500 ml 95 % ethanol til 300 ml vand og derefter tilsætte 100 mL eddikesyre syre . Endelig sætter volumen op til 1 L med vand .
3 .
vaskevandet ( 50 % methanol i vand med 10 % eddikesyre ) bør forberedes ved at tilsætte 500 ml methanol til 300 mL vand og derefter tilsætte 100 mL eddikesyre . Endelig sætter volumen op til 1 L med vand .
4 .
Den Coomassie pletten løsning (0,1 % Coomassie blå R350 , 20 % methanol 10 % eddikesyre ) bør forberedes ved at tilføje opløse 0 . 4 g Coomassie blå R350 i 200 ml 40 % methanol i vand ( røre ) . Opløsningen filtreres . Tilsættes 200 ml 20 % eddikesyre i vand .
5 .
Den affarves løsning (50 % methanol i vand med 10 % eddikesyre ) bør forberedes ved at tilsætte 500 ml methanol til 300 mL vand og derefter tilsætte 100 mL eddikesyre . Endelig sætter volumen op til 1 L med vand .
6 .
Den storageløsning (5 % eddikesyre ) bør forberedes ved at tilsætte 25 mL eddikesyre til 400 ml vand og så den endelige volumen op til 500 ml med vand .
7 .
Når disse løsninger er blevet forberedt , kan du køre en SDS polyacrylamid gel med protein prøver . Når gelen har kørt til ende farvningen processen kan begynde .
8 .
Dæk gelen med fastsættelse opløsning i 1 time. Fjern fastsættelse løsning ved aspiration og dække med vaskeoploesningen natten over ved stuetemperatur med forsigtig omrystning. Fjern vaskeopløsning ved aspiration og dækker gelen med Coosmassie pletten løsning i 4 timer ved stuetemperatur med forsigtig omrystning. Fjern Coomassie pletten løsning ved aspiration og dækker gelen med affarves opløsningen ved stuetemperatur med forsigtig omrystning. Ændre affarves løsning regelmæssigt ved aspiration , indtil det bliver klarere og protein bands kan ses . Endelig aspirer affarves løsning og dækker gelen med lagringsløsning til 1 time . Gel kan opbevares ved 4 grader celsius i storageløsning efter behov .

gode råd og advarsler


  • Dæk gel, når det er i vaskevandet natten for at undgå fordampning .
  • Bær handsker på alle tidspunkter!

  • Kommentarer

    Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

    link:

    • Om os
    • Advertising
    • Fortæl redaktionen
    • Få nyhedsbreve
    • RSS-feed

    Redaktør: Karin Christofferse
    Nyheder redactor: Morten Nyberg

    Kundeservice: Stig Ole Salomon,
    Flemming Sørensen

    Tel: +45 00 99 99 00
    Fax: +45 00 99 99 01

    © Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.