hvordan molekylær kloning arbejde ?

Introduktion til Kloning

Molekylær kloning er processen med at lave kopier af et stykke af genetisk information til videre analyse . Denne proces sker ved at overføre et stykke DNA fra en organisme til et molekyle , der kan gengive kopier af de overførte DNA . Molekylet oftest bruges til at lave kopier af DNA i molekylær kloning er et stof, der kaldes en bakterieplasmid . Plasmider er uafhængige former for liv , som ikke behøver at være i værten bakterier til at generere DNA kopier . Molekylære kloningsteknikker anvendes hyppigt i laboratoriet og har været i brug siden deres opdagelse i 1970'erne .

DNA Isolation og overførsel

Før DNA blev undersøgt kan indsættes i et plasmid adskilt først skal isoleres , udgør resten af DNA og brudt ind fragmenter . Det første skridt i denne proces , isolering af den del af DNA , der vil blive gentaget , sker ved hjælp af en række teknikker , de mest almindelige , som kaldes polymerase chain reaction , eller PCR . PCR -metoden ikke blot isolater et stykke DNA , det øger også mængden af DNA til rådighed . Denne forstærkede del af DNA derefter indsættes i et plasmid ( eller andre lignende vektor ) og behandlet med specialiserede enzymer , der forbereder dna til replikation . Disse enzymer bryde DNA i lineære fragmenter og behandle disse fragmenter i DNA- strenge , der kun indeholder DNA interesse . Det forarbejdede plasmid er nu klar til overdragelse .

Transfektering

De forberedte plasmid er næste overføres til en række bakterier celle gennem en proces, der kaldes transfektion . Transfektion sker oftest ved hjælp af en proces, der kaldes elektroporation , selv om der er en række teknikker , som kan udrette transfektering . Elektroporation virker ved at øge værtsceller » permeabilitet ved hjælp af et elektrisk felt for at skabe porer i cellevæggen . Bakterierne , der indeholder forarbejdede plasmid derefter overføres til en vækst plade , hvor kolonier af cellerne dyrkes .

Identifikation og bekræftelse af succes

De processer involveret i at skabe en molekylær klon er slet ikke effektivt . Forud for overdragelsen til væksten pladen bakterierne er mærket på en måde, så bakterier der indeholder de ønskede DNA kan identificeres visuelt med en farve markør , eller at kun de bakterier med de ønskede DNA er i stand til at vokse . Kolonierne , der udvikler derefter testes for at sikre , at det ønskede DNA er til stede . Når DNA-sekvensen er bekræftet bakterier kan derefter bruges til efterforskning undersøgelser .


Kommentarer

Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

link:

  • Om os
  • Advertising
  • Fortæl redaktionen
  • Få nyhedsbreve
  • RSS-feed

Redaktør: Karin Christofferse
Nyheder redactor: Morten Nyberg

Kundeservice: Stig Ole Salomon,
Flemming Sørensen

Tel: +45 00 99 99 00
Fax: +45 00 99 99 01

© Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.