Hvordan undgår jeg PCR primer dimer ?

En polymerase chain reaction ( PCR ) anvendes til at skabe millioner af eksemplarer af en deoxyribonukleinsyre ( DNA ) sekvens . Denne teknik bruges i retsvidenskab til at replikere små mængder af DNA fundet i biologiske prøver på gerningssteder , således at råde over tilstrækkelige mængder til at analysere for beviser. Det er også meget udbredt i molekylær biologi og bioteknologi forskning til at generere store mængder af en prøve til eksperimenter . For at starte replikation processen , er du nødt korte sekvenser af DNA kaldet primere , der fastgøres til længere DNA sekvens, der skal gentages . Nogle gange primere tillægger hinanden i stedet for at målet DNA-sekvens, der dimerer , som hæmmer replikationen processen
1 .
Design din primere , så de ikke er selvstændige supplerer sig selv eller hinanden , især på den 3 ' ende . Det betyder, at man undgår sekvenser af nukleotider i din primer design, der har tendens til at krydse sig med andre sekvenser inden for primer .
2 .
Hold guanin og cytosin ( G + C ) koncentrationer i din primer mellem 40 procent og 60 procent . G og C har en større tilbøjelighed til at krydse sig med hinanden og dermed øge chancerne for dimerization .
3 .
Brug en " varm start " polymerase enzym til din PCR . En varm start enzym er kun aktiv , når temperaturen på din reaktion har været på 95 grader Celsius i 10 til 12 minutter , i modsætning til en normal polymerase , som er aktiv ved lavere temperaturer . Den varme start giver mål-DNA sekvensen til at denaturere grundigt, før enzymet bliver aktiv , minimere dannelsen af primer-dimerer , der kan opstå ved lavere temperaturer med en normal polymerase .
4 .
Conduct prøvekørsler til din PCR , hvor du variere koncentrationen af dine primere til at finde den laveste koncentration, hvor din reaktion vil blive en succes . Lav primer koncentrationer reducerer chancen for at få primer-dimerer .


Kommentarer

Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

link:

  • Om os
  • Advertising
  • Fortæl redaktionen
  • Få nyhedsbreve
  • RSS-feed

Redaktør: Karin Christofferse
Nyheder redactor: Morten Nyberg

Kundeservice: Stig Ole Salomon,
Flemming Sørensen

Tel: +45 00 99 99 00
Fax: +45 00 99 99 01

© Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.