hvorfor er natrium , der anvendes i DNA-ekstraktion ?

DNA ikke flyder rundt frit i kernen af en celle . Det er forbundet med en række forskellige proteiner og indkapslet i et trådløst membran . I animalske celler , er DNA også indeholdt i et nukleart membran . For at udvinde DNA fra en celle , skal den tilhørende membraner og proteiner først fjernes , og derefter fysisk adskilt fra DNA . Natrium kan inddrages i flere af de skridt at nå dette mål

Sodium som en Detergent

Natrium er et element . Det er kemiske symbol er Na for Natrium , det latinske ord for natrium . Det er en positiv ion og ofte associerede med negative ioner som en del af nyttige stoffer . For eksempel , når natriumioner er bundet til kloridioner de gør det sammensatte natriumklorid , som er almindelige bordsalt .

Flere forskellige former for natrium anvendes i DNA ekstraktion . Natriumdodecylsulfat , eller SDS . er en natrium-indhold vaskemiddel . Det har den kemiske formel for C12H25NaO4S , hvor Na står for natrium . Rengøringsmidler er vant til at nedbryde cellevægge og membraner . De virker ved kemisk stikke huller i cellemembranerne eller vægge .

Når hullerne er borede i membraner , kan de membraner yderligere afbrudt mekanisk , som med en blender . Efter dette, er det lettere at få indholdet af cellen , inklusive DNA .

Sodium som en Alkaline Agent

Natriumhydroxid er et andet stof , der indeholder natrium , der bruges til at udvinde DNA fra en celle . Den kemiske formel for natriumhydroxid NaOH . Natriumhydroxid er en base . En opløsning af natriumhydroxid gør løsningen meget grundlæggende eller alkalisk . Natriumhydroxid kan handle ved at løsne stive struktur af en celle væg eller membran og dermed frigøre DNA .

Natriumhydroxid bruges oftest i plasmid DNA ekstraktion . Plasmid DNA i bakterier normalt findes i en ring form i cytoplasmaet , adskilt fra kromosomal DNA i kernen . Mens kromosomal DNA programmer bakteriecellen funktioner og processer , plasmid DNA er ofte en genetisk manipuleret DNA, som koder for et bestemt gen eller gener af interesse . Plasmider er meget værdifuld forskning redskaber og deres udvinding fra bakterieceller er en rutine laboratorium procedure .

For at adskille den bakterielle kromosom DNA og knækket DNA fra plasmidet DNA er natriumhydroxid anvendes ofte . Kromosomal DNA og knækket DNA er både lineære , mens plasmid DNA er cirkulær . Når opløsningen er grundlæggende , for eksempel, når natriumhydroxid er tilsat dobbelt-strenget DNA -molekyler adskilt. Dette er kendt som denaturering . Deres komplementære baser er ikke længere forbundet med hinanden . Dette kan opfattes på samme måde som de to komplementære sider af en lynlås . Når DNA er dobbelt-strandede , er det lynlås lynlås op . Når DNA denatureres , er lynlåsen ikke kun unzipped , men de to områder er helt adskilt fra hinanden , ligesom i en jakke .

På den anden side , plasmid DNA molekyler , selv om de er pakket ud , er ikke adskilt . Den cirkulære tråde kan nemt finde deres aktioner, som supplerer og " renature " tilbage i en cirkulær dobbelt-strandede plasmid DNA -molekyle , når løsningen er ikke længere basisk . Dette er en af de unikke egenskaber af plasmider , som tillader dem at være adskilt fra kromosomale DNA . På denne måde kan plasmid DNA med det ønskede gen af renter blive fjernet og adskilt fra den almindelige bakterielle kromosom -DNA.

natriumacetat 's rolle

Natrium kan også være i form af natriumacetat . Ligesom natriumhydroxid er natriumacetat bruges til at hjælpe adskille plasmid DNA fra kromosomal DNA , men af en meget anderledes mekanisme og på en anden del af DNA-ekstraktion procedure .

Single dele af lineære DNA er uopløseligt i høj salt . De vil danne bundfald , danner en solid . Tilføjelse natriumacetat til SDS rensemidler former faste stoffer i celleaffald samt denatureret kromosomal lineær DNA . Cirkulære plasmid DNA er ikke uopløseligt i høj salt . Plasmid DNA forbliver i opløsning , og dermed adskiller den ønskede plasmid DNA fra resten af DNA i cellen .

Natriumhydroxid indeholder de grundlæggende løsning til at denaturere og udpak DNA-strenge , både plasmid og kromosomforandringer . Når DNA er ikke længere i alkalisk opløsning , kan kun plasmid DNA lynlås op igen. For at adskille denatureret , udpakket , kromosomal DNA fra renatured , lynlås-up plasmid DNA , er natriumacetat bruges til selektivt at faelde kromosom DNA og andre celleaffald væk fra det ønskede dobbelt-strandede plasmid DNA .

rolle Natrium i DNA Nedbør

Udfældet kromosomal DNA og celleaffald kan fjernes fra den opløselige plasmid DNA stadig i opløsning ved centrifugering , en high- speed spinning proces, som forårsager faste stoffer , der skal tvinges ind i bunden af et rør som en lille pillen , der tillader væsken øverst indeholder plasmid DNA holdes adskilt .

Dette plasmid DNA kan derefter udfældet af løsningen ved at tilføje en alkohol og en salt . Det er ofte ønskeligt at bundfald plasmidet DNA for at koncentrere sin beløb i opløsning og for at bringe den tilbage op i en løsning, der er ved at stabilisere at dets kemiske struktur . Saltet , der anvendes til at fremskynde den plasmid DNA kan natriumklorid eller natrium acetat , for eksempel, men kan også være ammoniumacetat eller lithium chlorid .

Natrium er en positivt ladet ion . I en opløsning af natriumklorid , bordsalt , for eksempel natriumklorid molekyle deles i natriumioner og chloridioner . DNA , og på den anden side , er meget negativt ladet . Det store negative ladning af DNA -molekylet er neutraliseret af den positive natriumioner i opløsning . Denne neutralisering af den negative afgifter på DNA gør det muligt at fremskynde i alkohol . Uden salt , forbliver DNA negativt ladede og vil forblive i den vandige del af løsningen .

Hvis denne blanding er centrifugeres , det fældes plasmid DNA bliver en pellet i bunden af glasset . Den flydende del kan fjernes , og DNA kan derefter sættes tilbage i opløsning , eller resuspenderet i en anden løsning på den ønskede koncentration .

Sodium som en del af stoedpudeoploesning

DNA er normalt resuspenderes i en løsning indeholder Tris og EDTA . Dette kaldes en buffer løsning . EDTA står for den kemiske ethylendiamin tetracetic syre , og som regel findes i laboratoriet som en dinatriumsalt , Na2C10H16N2O8 . Buffere bruges til at forhindre drastiske pH-ændringer , og i dette tilfælde , /tris EDTA holder DNA i opløsning i en pH-område på omkring 7 . 0 til 9,0 .


Kommentarer

Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

link:

  • Om os
  • Advertising
  • Fortæl redaktionen
  • Få nyhedsbreve
  • RSS-feed

Redaktør: Karin Christofferse
Nyheder redactor: Morten Nyberg

Kundeservice: Stig Ole Salomon,
Flemming Sørensen

Tel: +45 00 99 99 00
Fax: +45 00 99 99 01

© Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.