elektroforese buffer forberedelse

Gelelektroforese er en af de mest almindelige procedurer udføres i biokemi og molekylær biologi laboratorier . Denne procedure kræver brug af en bufferopløsning , der skal udføres med succes . Vide hvordan man kan forberede buffer løsning sikrer en klar indberette, når behovet opstår

Du skal bruge: .
Store PVC-rør eller røgrøret føres
1- tommer-tykke behandlet træ .
4 L-beslag med skruer .
Saw .
Blyant .
Bor .
Skruetrækker .
Gamle vinylplader .
2- tommer PVC-rør .
4- fods ledning .

Funktion

Effektiv gel elektroforese kræver en buffer løsning . Under elektroforese , er gelematrice neddyppes i en løsning , der giver mulighed for elektrisk ledningsevne og opretholder en konsekvent pH . Koncentrationen af den bufferopløsning spiller også en afgørende rolle i antallet af migrationen af de molekyler, at være adskilt . En høj koncentration af buffer vil medføre hurtigere migration . Ud over at vælge koncentrationen af den buffer, der bruges under en elektroforese procedure , spiller den type af buffer benyttes også en vigtig rolle .

Buffer Typer

De to buffere , der er mest almindeligt brugte i løbet af gelelektroforese er tris-acetat-EDTA ( TAE ) og trisborat-EDTA ( TBE ) . Bestemmelse af, hvilke buffer til at bruge , afhænger af en række faktorer . TAE er meget effektiv til at adskille fragmenter større end 4. 000 basepar . Det er også bruges til at adskille super-coiled DNA .

TBE er mest effektive for fragmenter mellem en og 3000 basepar i længden . Det er også den mest effektive løsning , når du bruger spænding beløb på over 150 volt .

Udarbejdelse af TAE

Forberedelse en 50X bestand TAE løsning består af tre trin og fire ingredienser . For hver liter oploesning ønskede , blandes 242 gram Tris base med ca 600 ml deioniseret vand , indtil opløst . Tilføj 57,1 ml iseddike og 100 ml 0,5 M EDTA , pH 8,0 . Til sidst tilsættes deioniseret vand , indtil den endelige løsning rumfang er en liter . Opbevares tæt dækket ved stuetemperatur .

Udarbejdelse af TBE

For at forberede en liter 50X bestand TBE løsning , kombinerer 540 gram Tris base med ca 600 ml deioniseret vand og rør indtil opløst . Bland i 275 gram borsyre og 200 ml 0,5 M EDTA , pH 8,0 . Tilføj deioniseret vand , indtil den samlede løsning rumfang er en liter . Autoklaven i 20 minutter, derefter opbevares tæt lukket ved stuetemperatur .

Udvanding og anvendelse

Disse meget koncentrerede stamopløsninger kan derefter fortyndes i mindre koncentrationer efter behov ved at blande mindre mængder af den bestand løsninger med deioniseret vand .


Kommentarer

Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

link:

  • Om os
  • Advertising
  • Fortæl redaktionen
  • Få nyhedsbreve
  • RSS-feed

Redaktør: Karin Christofferse
Nyheder redactor: Morten Nyberg

Kundeservice: Stig Ole Salomon,
Flemming Sørensen

Tel: +45 00 99 99 00
Fax: +45 00 99 99 01

© Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.