hvad er funktionen af en tris buffer i DNA ekstraktion ?

Tris , eller tris ( hydroxymethyl ) aminomethan , er en fælles biologisk buffer , anvendes i hele DNA-ekstraktion processen . Under ekstraktionen fra et vilkårligt antal kilder , er DNA pH følsom . Under cellelysis , fjernelse af uønsket cellulære komponenter og nedbør , er tris bruges til at opretholde en stabil pH-værdi . Derudover er det spiller en særlig vigtig rolle i celle lysis

Tris som en buffer

Som pH kan påvirke og blive påvirket af en række af cellulære faktorer , opretholdelse af en stabil pH er afgørende for eksperimentel videnskab . Biologisk buffere , som tris , er vigtige, fordi de kan opretholde en stabil pH-værdi på trods af påvirkninger , der ellers ville flytte pH . Tris ( hydroxymethyl ) aminomethan , med en pKa på 8,1 , er en effektiv buffer mellem pH 7 og 9 . På grund af sin neutrale sortiment , er tris et almindeligt brugt buffer i biologiske laboratorier . Men , tris buffer er temperatur følsomme og skal bruges ved den temperatur , hvor det oprindeligt var pHed at undgå unøjagtighed .

Lysis af celler

Lysis , eller bryde åbne cellerne , er det første skridt af DNA ekstraktion . Dette opnås ved en buffer indeholdende tris og EDTA ( ethylendiamintetra syre ) . EDTA binder divalente kationer som calcium og magnesium . Da disse ioner bidrage til at opretholde integriteten af cellemembranen , at fjerne dem med EDTA destabiliserer membranen . Tris er det vigtigste buffering komponent , dens chef rolle er at opretholde pH i bufferen på et stabilt , normalt 8,0 . Derudover tris sandsynligt interagerer med LPS ( lipopolysaccharide ) i membranen , der tjener til at destabilisere membranen yderligere .

Tris Beskytter DNA fra pH Skifter

Når cellerne er brudt ud , deres DNA og indhold spilde i bufferen . Derudover RNase A ( ødelægger RNA ) , proteaser ( ødelægger proteiner ) , og SDS ( natriumdodecylsulfat , solubilizes membranen fragmenter ) er ofte inkluderet . Tilsammen denne suppe af cellulære indhold og fragmenteret RNA og proteiner kan have en stor indvirkning på pH i opløsningen . Fordi DNA er pH følsomme, er det vigtigt for tris at buffer i suppen og fastholde pH med en konstant punkt .

DNA Percipitation

I den afsluttende fase af dna-ekstraktion , er DNA selv udvundet fra opløsningen . På dette punkt er det DNA opløseligt i bufferen . At udtrække fra den løsning , er det DNA lavet uopløselig i vand ved tilsætning af ethanol eller isopropanol ( isopropylalkohol ) . Når dette er gjort , DNA bliver indlysende i opløsning som en hvid thready stof . Selv om DNA kan isoleres fra de resterende cellulære komponenter på denne måde , er det ikke " bruges ", når det er uopløseligt . Efter isolation , er alkohol fjernes, og DNA skal returneres til et biologisk buffer , som tris , der skal anvendes .

Do It Yourself

Selv om udvinding af DNA almindeligt foregår i forskningslaboratorier generelt ved hjælp af en af en række kommercielt tilgængelige kits , kan man gøre DNA-ekstraktion derhjemme ved hjælp af fælles husholdningsartikler og grønne ærter eller spinat . I dette tilfælde , tris eller nogen biologisk buffer , ikke er til stede for at beskytte DNA fra pH skift . Men det er en visuel måde at hjælpe de studerende i forbindelse med cellulære DNA .


Kommentarer

Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

link:

  • Om os
  • Advertising
  • Fortæl redaktionen
  • Få nyhedsbreve
  • RSS-feed

Redaktør: Karin Christofferse
Nyheder redactor: Morten Nyberg

Kundeservice: Stig Ole Salomon,
Flemming Sørensen

Tel: +45 00 99 99 00
Fax: +45 00 99 99 01

© Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.