hvordan man beregner kcat

I kemiske reaktioner katalyseres af et enzym , sænker enzym mængden af aktivering energi, der kræves ved midlertidigt limning med underlaget og dreje det i en anstrengt tilstand . K ( katalysator ) eller " kcat " for reaktionen vedrører koncentrationen-uafhængige konstant for hastigheden , som en bestemt enzym kan nedbryde et substrat til et produkt molekyle . At beregne kcat , videnskabsfolk første blanding af forskellige reagensglas med forskellige koncentrationer af substrat ( kendt som en " enzymatisk assay ") og teste dem ved konstant tidsintervaller med en let spektrofotometer til måling af stigende koncentrationer af produktet molekyler . Disse data er derefter plottes ind på en graf og analyseret

Du skal bruge: .
Rå data fra en enzymatisk assay ( i.
e.
, produkt koncentration vs
 tid ) .

Beregning Oprindeligt Hastigheder


1 .
Plot et diagram produkt koncentrationen mod tiden for data fra den enzymatiske assay første reagensglas . Bemærk : den vandrette akse skal være " tid ", og den lodrette akse skal
2
Beregn den lineære regressionslinje for datapunkterne du plottet i afdeling 1 " produkt koncentration . " . , Trin 1 . Mens Excel og grafregnere nemt kan bestemme denne lineære model , kan du udlede et skøn over regressionslinjen hældning ved at dividere forskellen i produktet fusion mellem tilstødende datapunkter ved deres forskel i tid .
3 .

Optag hældningen på den lineære regressionslinje fra afsnit 1 , trin 2 som " første reaktion hastighed ( Vo ) . " Bemærk : I regressionslinjen model " [ produkt koncentration ]=m [ tid ] + b , " koefficient " m " er hældningen
4
Gentag trin 1 , 2 og . 3 for resten af reagensglas i analysen .

Beregning Vmax


1 .
Plot den inverse af substratkoncentrationen for hvert prøveglas forhold til den omvendte sin første reaktion hastighed ( fra afsnit 1 , Trin 4 ) . For eksempel , den oprindelige hastighed for et reagensglas med en indledende substrat koncentration på 50 mikromolær (UM ) , hvis var 80 UM /s, inverse ville være 1 /50 um for substratkoncentrationen og 1 /80 UM /s for den oprindelige hastighed . Bemærk : det modsatte substratkoncentrationen skal være på den vandrette akse , og den omvendte starthastighed skal være på den lodrette akse .
Bemærk : substrat koncentration bør være på den vandrette akse , og første reaktion hastighed skal være på den lodrette akse
2
Bestem den lineære regressionslinje for. det diagram, du plottet i § 2 , trin 1 . Bemærk : fordi du bliver nødt til at kende y-skærer for regressionslinjen , skal du indtaste point fra afdeling 2 , trin 1 til enten Excel eller en grafregnerapplikation og bruge den indbyggede regression modellering funktionalitet

3 .
Del 1 af y-krydser fra den lineære regressionslinje . Dette vil give dig værdien af den inverse af Vmax den maksimale reaktion hastighed for enzymet . Bemærk : Hvis den lineære regressionsmodel tager form " [ Inverse Vo ]=m [ Inverse substrat konc. ] + b , "så værdien af " b "ville være y-krydsfelt . Opdel 1 af "b " til at beregne den inverse af Vmax .
4 .
Del 1 af resultatet fra afsnit 2 , Trin 3 for at beregne den faktiske værdi af Vmax .

5 .
Bestem koncentrationen af enzymet i den oprindelige analyse ( se de rå data) . Bemærk : enzymet koncentrationen er den samme for alle de reagensglas , kun substrat koncentrationen varierer i analysen
6
Del Vmax ( fra afdeling 2 , Trin 4 ) af. enzymet koncentration ( fra afsnit 2 , trin 5) . Resultatet er værdien af Kcat .


Kommentarer

Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

link:

  • Om os
  • Advertising
  • Fortæl redaktionen
  • Få nyhedsbreve
  • RSS-feed

Redaktør: Karin Christofferse
Nyheder redactor: Morten Nyberg

Kundeservice: Stig Ole Salomon,
Flemming Sørensen

Tel: +45 00 99 99 00
Fax: +45 00 99 99 01

© Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.