sonikering tips

Sonikering er en allestedsnærværende benyttede klipning åbne celler i molekylære , cellulære , mikrobiologi og andre laboratorier. Sonikering er nyttig, da den ikke ændrer den kemiske sammensætning af celler eller celler « buffer , og påvirker ikke ansvarlig for cellerne som elektroporation metoder gør . Det er en forholdsvis simpel proces , som bør tilpasses , afhængigt af ens eksperiment bruges og celletyper , og der er kun nogle få vigtige tips til at følge

Du skal bruge: .
Stor plast sand scoop
. Stor plast sand si .
Stor plast sand spand .
Tunge plasticpose med lynlås lukning .

Processen

Først , forberede cellen prøven i sin passende buffer eller medier , og cool denne prøve i et bægerglas af is ( eller isvand for hurtigere afkøling) . Vask dyse sonikering maskine med vand , og tør med en Kimwipe .
Skift sonikering /Cell disruptor maskinen, og juster Udgangseffekt en passende watt , afhængigt af celletype og eksperimentere . Sæt dysen på sonicator i din celle prøverøret og tænd for maskinen , giver sonikering at forekomme i fem til 30 sekunder ad gangen . ( Tilladelse sonikering længere end 30 sekunder drastisk varmer op prøven og kan ofte medføre denaturering . ) Mens sonicating forsigtigt flytte proeveroeret omkring dysen at give dysen adgang til forskellige områder af volumen . Det er generelt bedst ikke at tillade spidsen af dysen for at nå nær overfladen af omfanget , da dette kan forårsage boblende /skummende af din prøve .
Efter den første sonikering , bland din prøve ved at vende flere gange , så sonikeres igen til en lige lang tid , alt imens holder prøven på is .

optimering er vigtigt

Det er generelt bedst til at optimere din sonikering protokol for hver af de forskellige celle anvendt linje , som man må finde en ideel balance mellem nok knækket celler og minimal denaturering /beskadigelse af prøven . Dette kan gøres ved sonicating til forskellige tid længder og Udgangseffekt indstillinger , derefter kontrollere cellerne under mikroskop til fraktionering .
For eksempel kan man starte med at gøre tre fem -sekunders serier til 50 procent strøm , derefter stigende tid og kraft, hvis kun en lille del af den pågældende cellepopulation vises fraktioneres under mikroskop .

konkret eksempel

For eksempel kan E. Coli celler , der anvendes til vækst og rensning af en overflade-receptor-bindende protein ( C-terminal fragment af Clostridium perfringens enterotoksin , eller " C-CPE " ) være sonicated i en volumen på 7 til 10 ml for to 30-sekunders serier ved maksimal udgangseffekt . Cellesuspensionen buffer er 1x PBS med 0. 2mg/mL lysozym .
sonikering anordning, der anvendes til dette er en Microson Ultrasonic Cell disruptor .


Kommentarer

Vi ønsker, at dine argumenter og meninger er velkomne. Være objektiv og medfølelse. Mange mennesker læser hvad du skriver. Gør debat til en bedre oplevelse for både dem og dig selv. Mellem 20:00 og 08:00 det er lukket for kommentering og vi fjerner automatisk kommentarer med sjofle ord, defineret af vores moderatorer.

link:

  • Om os
  • Advertising
  • Fortæl redaktionen
  • Få nyhedsbreve
  • RSS-feed

Redaktør: Karin Christofferse
Nyheder redactor: Morten Nyberg

Kundeservice: Stig Ole Salomon,
Flemming Sørensen

Tel: +45 00 99 99 00
Fax: +45 00 99 99 01

© Copyright 2014 Einsten.net - All rights reserved.